前沿资讯

荧光原位杂交技术介绍

来源:《遗传病分子基础》  作者: 曾溢滔  日期:2020-07-28

  1、原理

  荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH)技术的基本原理是采用标记的寡聚核苷酸探针与变性后的染色体、细胞或组织中的核酸进行杂交,然后在荧光显微镜下显影,对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。

  2、应用

  2.1确定异常染色体的来源

  对于用染色体核型分析较难归类的环状染色体、双随体双着丝粒的额外小染色体、染色体附加片段和染色体重排等,可应用FISH探针进一步证实染色体带型,确定异常染色体的来源。

  2.2基因定位

  利用特异FISH探针与分裂中期细胞DNA进行原位杂交,不仅可以定位某一基因或特定DNA片段在染色体上的位置,还可以根据不同颜色杂交位点的相互位置确定两种或两种以上的基因在染色体上的排列次序。

  2.3产前诊断

  虽然传统的染色体核型分析仍然是产前诊断最主要的方法,但该方法存在耗时长、技术难度大、易受培养条件影响等不足之处。应用FISH技术可直接检测未经羊水或绒毛培养的分裂间期细胞,而且具有快速、简便和特异的特点,可作为一种快速产前诊断方法,目前临床。上主要用于13、18、21、X、Y染色体数目异常的诊断。

  2.4辅助诊断染色体疾病

  根据目的基因设计特异FISH探针可辅助诊断多种染色体疾病,如染色体异位、倒位缺失和重复等“.与染色体核型分析技术相比,FISH技术不需要培养就可以用分裂间期细胞进行检测,且可用于分析的细胞数目远远大于染色体核型分析的数目,因此特别适合一些不能用于染色体核型分析的样本。

荧光原位杂交

  3、质量控制及注意事项

  洗脱步骤很关键,增加洗脱时间,升高温度或降低SSC溶液盐浓度均可导致信号减弱甚至消失,反之可导致背景信号增强。

  探针和做过FISH的片子都要避光保存在-20℃冰箱中。

  需有两名具有相应资质的专业技术人员计数,两人计数结果误差率应控制在10%以内,如果大于10%,则需增加一位专业技术人员再进行计数。必要时需重新做一次FISH以保证结果准确可靠。

  计数的细胞必须是完整的,与其他细胞没有相互重叠。细胞中需有清晰可辨的信号,且在细,胞核内。避免计数信号在胞核边缘的细胞及异常明亮或者背景很强的细胞,以免影响结果判断。

  对于一个样本,要做好结果记录并至少采集存储两张图片。记录单。上要有受检者姓名、性别、年龄、编号、样本来源、收到日期、出报告日期和检测者姓名等。

  注意做好实验对照,每个所测样本都需有对照的探针同时进行杂交。新批号的试剂或探针在应用前需先做对照的预实验并做好记录。

  FISH技术应用基因特异性的探针,可以更准确和更精细地对基因进行定性、定量分析;但另一方面,特异性探针也限制了该技术在基因筛查方面的应用,所以FISH技术更适用于特定基因的检测分析。

手机(24小时)18030879397

在线咨询:09:00~17:30