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dna亲子鉴定实验室要求和流程

来源:《广西医学》  作者: 杨亚丽  日期:2020-08-24

  亲子鉴定是对可疑的父与子或母与子之间的亲生关系进行判断, 并作出肯定或否定结论的鉴定活动。其主要用于上户口、有疑虑、移民、寻亲、医院纠纷、户口迁移、信息更改、抚养纠纷等场合,参与鉴定活动的机构必须具备司法鉴定许可证、持证技术人员以及通过资质认定的实验室。下面我们主要谈谈亲子鉴定的仪器、试剂、实验室要求及鉴定操作流程。

  1、亲子鉴定主要仪器

  3130 DNA测序仪 (美国Applied Biosystems公司生产) 、9700PCR扩增仪 (美国Applied Biosystems公司生产) 、CASCADA超纯水制造系统 (美国Pall Corporation公司生产) 、SG603生物安全柜 (美国The Baker Company公司生产) 、5415D高速离心机 (德国Eppendorf AG公司生产) 、Thermomixer Comfort半导体温控混匀仪 (德国Eppendorf AG公司生产) 等。

  2、亲子鉴定主要试剂

  Chelex-100 (美国Bio-Rad Laboratories公司生产) 、Identifiler试剂盒、POP4胶、GS-500 LIZ荧光染料、超纯甲酰胺 (美国Applied Biosystems公司生产) 等。

  3、DNA实验室建设要求

  亲子鉴定实验室按照生物安全二级标准建设, 实验室分为试剂准备间、DNA提取间、PCR加样间、PCR扩增间和样品分析间5个区域, 各区的物品有明显标识, 严禁混用。实验室工作人员严格遵循试剂准备间→DNA提取间→PCR加样间→PCR扩增间→样品分析间的单向走动原则, 不能逆向走动。同时, 实验室配备了测序仪、扩增仪、高速离心机等仪器设备。

亲子鉴定实验室

  4、亲子鉴定方法

  1.采样:

  抽取每个当事人静脉血3~5 ml, 5%EDTA抗凝。

  2.DNA提取:

  Chelex100法提取全基因组DNA.

  3.PCR扩增:

  用Identifiler试剂盒进行PCR扩增D5S818、D13S317、D7S820、D8S1179、D21S11、D18S 51、D3S1358、VWA、FGA、Amex、TH01、D16D539、D2S1338、D19D433、TPOX、CSF1P0等16个STR基因位点。反应体系:PCR Reaction Mix 9.5 μl, Primer 5 μl, PE Taq Gold (5 U/μl) 0.5 μl, DNA模板10 μl, 总体积25 μl.PCR反应在9700PCR扩增仪上进行, 扩增条件:95℃预变性11 min, 然后94℃变性1 min, 59℃复性1 min, 72℃延伸1 min, 共28个循环, 最后60℃延伸60 min, 4℃保存。

  4.PCR产物分析:

  取PCR扩增产物1 μl, 加入超纯甲酰胺8.7 μl, GS-500 LIZ分子量标记0.3 μl, 混匀, 95℃变性3 min后, 在3130 DNA测序仪上电泳, 电泳结果用Gene MapperID v3.2软件对片段大小进行分析, 最后得出STR分型结果。

  5.结果判断:

  肯定亲子关系时应计算亲子关系概率, 按照国际标准, 亲子关系概率应大于99.73%才能认定。检测的遗传位点中如果有3个位点以上不符合孟德尔遗传规律, 可以排除亲子关系;如果有1~2个位点不符合遗传规律, 增加检测红细胞、HLA和血小板基因, 如果增加检测的基因位点符合遗传规律, 则不能排除亲子关系, 如果有1个以上位点不符合遗传规律, 则可以排除亲子关系。

  亲子鉴定是一项科学实证活动, 鉴定结论直接影响法官的审判结果, 为了保证每一份鉴定书的质量,DNA实验室要求采用高标准,建设生物安全二级的PCR实验室, 配置测序仪、扩增仪、高速离心机等世界先进的仪器设备。同时注重人才培养, 吸收博士、硕士学位的高学历技术人员, 他们不仅具备深厚的基础知识和扎实的实验技能, 而且经过专门法医物证鉴定技术培训上岗。实验室还需要建立了完善的质量管理体系, 通过了司法鉴定机构实验室资质认定, 确保出具的鉴定报告准确、可靠。

  总之, 亲子鉴定实验室的建设不仅要注重硬件建设, 还要加强软件建设, 注重培养司法鉴定人员的专业知识、专业技能和专业素质, 在为社会提供亲子鉴定服务同时, 还要提供咨询服务和技术支持, 同时开展STR基因位点检测的相关研究。

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